153-2012-0258
Kim Horne, AAS, CVT, VTS （Dermatology）
Marcia Schwassmann, DVM, DACVD
Dawn Logas, DVM, DACVD
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皮肤真菌培养
皮肤真菌培养通常是诊断皮肤真菌病的必需手段。普通诊所经常使用皮肤真菌培养基（DTM）（图1.51）。
这种培养基含有一种酚红指示剂，可以使培养基变红。有皮肤真菌和腐生菌（污染物）时都会出现这种颜色变化。
因此，每天或每隔一天检查这些培养基，观察颜色变化和菌落生长的速度是很重要的。皮肤真菌通常比腐生菌能更早地使培养基变红，通常在7 - 10天内。颜色变化出现在菌落生长之前或与菌落生长同时出现具有意义。
图1.51扁平真菌培养基的例子——皮肤真菌测试培养基（琥珀色）和沙保葡萄糖琼脂培养基。
检查步骤:
1）拔下靠近病变边缘的可疑毛发（断毛或畸形毛发；与皮屑、结痂或炎症等病变的相关毛发；或在伍德式灯下荧光呈阳性的毛发），或使用麦肯齐牙刷技术采集临床正常动物的毛发。
2）将收集的毛发轻轻按在皮肤真菌测试培养基。
3）室温下，将皮肤真菌测试培养基置于黑暗房间，理想条件为30℃和30%湿度 。
4）皮肤真菌测试培养基为有氧培养。
5）在确定阴性结果前培养至少需要三到四周。（注:已经开始治疗皮肤真菌病的动物可能需要更长时间才能在培养基上显示生长。）
6）显微镜鉴定菌落。（注意：如果你有一个可疑的菌落，有腐生菌过度生长的风险，你可以将这个可疑菌落接种到一个新培养基。）
图1.52 麦肯齐刷毛法。
麦肯齐牙刷技术
该技术对无症状动物（包括临床症状已消除的正在接受治疗的动物）特别有用。
步骤（图1.52）:
1）取出一个未打开的新牙刷，从头到脚刷患者的整个身体。
2）特别注意收集面部和耳朵的毛发。
3）将有毛的牙刷轻轻按在皮肤真菌测试培养基上。这一步你可能需要用针、手术刀或镊子从牙刷上取下毛发。为便于将头发样品放置在皮肤真菌测试培养基上，最好使用平板培养板。
胶带采样技术
一种用于识别皮肤真菌测试培养基的菌落生长的方法。
步骤（图1.53—1.56）:
1）在显微镜载玻片上滴一滴乳酚棉蓝或新亚甲基蓝染色剂。
2）使用透明的单面胶带。
3）用镊子抓住胶带，轻轻压在菌落上。
4）把胶带粘性的一面贴在载玻片上，然后盖上盖玻片。
5）为了便于收集，这种技术最好使用平板培养板。
6）10倍和40倍镜下鉴定大分生孢子。
图1.53用于菌落生长的胶带采样材料（胶带、染色剂和皮肤真菌试验培养基）。
图1.54将胶带轻轻按在可疑菌落上。
图1.55将胶带收集的材料压在载玻片上的染色剂上。
图1.56盖上盖玻片。
图1.57（a和b）每个活检部位皮下注射利多卡因。
图1.58轻轻将活检穿孔器按在患处，并开始向一个方向旋转去采集样本。
图1.59继续旋转，直到你感觉到穿孔器穿过皮肤（取决于取样区域的皮肤厚度，可能会把穿孔机的整个轮毂嵌入皮肤）。
图1.60当深度足够深时，取下冲头，用手指轻轻抓住样品。如果你不能用手指，那么试着用25号针头轻轻刺入样本来抬起皮肤（使用镊子可能会压碎组织）。
图1.61轻轻抬起样本，用虹膜剪尽可能在深处剪断。
图1.62用纱布轻轻擦干活检样本。
图1.63样品带毛发的一面向上，放在一块压舌板上。
图1.64将样品头发的一侧朝下放入装有10%缓冲福尔马林的罐子中。
皮肤活检也可用于收集有氧和厌氧的细菌培养和真菌培养的所需样本。在此过程中，皮肤部位应消毒，无菌采集样本并放入适当的运送培养基中。应与实验室联系了解相关知道和样本规定。
